發(fā)布時(shí)間 : 2020-06-17 閱讀次數(shù) : 163
做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn).但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂.怎么辦呢？
細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對(duì)著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán).然后從底部敲擊,使之分散.如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯(cuò),振幅小,頻率高.
一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度（我一般輕巧敲三下）,太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好）,依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱.
6孔板 12孔板或24孔板,均可采用將個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基,晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤(rùn)孔底,其它孔一次類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間,中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會(huì)出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下.
細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài).離心后,要充分懸浮.還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,需要晃動(dòng),晃的時(shí)候zui好不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會(huì)不均勻.
一瓶細(xì)胞長(zhǎng)滿后,正常處理,在培養(yǎng)瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放到培養(yǎng)箱里,輕微的左右前后各三圈.基本上24小時(shí)之后再觀察,每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻.
計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下觀察,如果不均勻,按上述方法再晃.如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子.
放在水平板面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個(gè)方向5到6次,但關(guān)鍵的是搖晃后zui好直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過多的運(yùn)動(dòng),例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了.
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