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ELISA的四種檢測(cè)方法?【白介素elisa試劑盒】

發(fā)布時(shí)間:2021/5/25 11:54:17      閱讀次數(shù):1186

 ELISA常用的四種方法

1.直接法測(cè)定抗原

將抗原吸附在載體表面;

加酶標(biāo)抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物;

加底物.底物的降解量=抗原量.

2.間接法測(cè)定抗體

將抗原吸附于固相載體表面;

加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物;

加酶標(biāo)抗體;

加底物. 測(cè)定底物的降解量=抗體量.

3.雙抗體夾心法測(cè)定抗原

將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;

加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;

加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;

加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);

加底物.底物的降解量=抗原量.

4. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原

將抗體吸附在固相載體表面;

(1) 加進(jìn)酶標(biāo)抗原;

(2),(3)加進(jìn)酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原;

加底物.對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量.

三.儀器和材料

1. 聚苯乙烯微量細(xì)胞培養(yǎng)板(平板, 40, 96孔).

2. 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀

3. 辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.

4. 包被液::0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.

5. 稀釋液:0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, 4℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.

6. 洗滌液:同稀釋液

7. 封閉液:0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.

8. 鄰苯二胺溶液(底物):臨用前配制 0.1M 檸檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O (7.163g/100ml) 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.

9. 終止液:2mol/LH2SO4.

四. 操縱步驟

1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16~18小時(shí).

2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,最后將反應(yīng)板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.

3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時(shí).

4. 洗滌同2.

5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時(shí)作稀釋液對(duì)照.37℃放置2小時(shí).

6. 洗滌同2.

7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí).

8. 洗滌同2.

9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘.

10. 加終止液:每孔50微升.

11. 觀察結(jié)果:用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄450nm讀數(shù).

泉州市睿信生物科技有限公司會(huì)定期發(fā)布新品推薦和產(chǎn)品規(guī)格參數(shù).公司主要經(jīng)營:elisa試劑盒 大鼠/小鼠/牛/羊/犬elisa試劑盒 人elisa試劑盒 胰島素/白介素/白細(xì)胞介素elisa試劑盒等產(chǎn)品.歡迎來電咨詢產(chǎn)品,新聞轉(zhuǎn)自網(wǎng)絡(luò),如果有內(nèi)容侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系本公司,會(huì)及時(shí)做出刪除處理,謝謝!ELISA常用的四種方法

1.直接法測(cè)定抗原

將抗原吸附在載體表面;

加酶標(biāo)抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物;

加底物.底物的降解量=抗原量.

2.間接法測(cè)定抗體

將抗原吸附于固相載體表面;

加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物;

加酶標(biāo)抗體;

加底物. 測(cè)定底物的降解量=抗體量.

3.雙抗體夾心法測(cè)定抗原

將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;

加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;

加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;

加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);

加底物.底物的降解量=抗原量.

4. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原

將抗體吸附在固相載體表面;

(1) 加進(jìn)酶標(biāo)抗原;

(2),(3)加進(jìn)酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原;

加底物.對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量.

三.儀器和材料

1. 聚苯乙烯微量細(xì)胞培養(yǎng)板(平板, 40, 96孔).

2. 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀

3. 辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.

4. 包被液::0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.

5. 稀釋液:0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, 4℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.

6. 洗滌液:同稀釋液

7. 封閉液:0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.

8. 鄰苯二胺溶液(底物):臨用前配制 0.1M 檸檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O (7.163g/100ml) 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.

9. 終止液:2mol/LH2SO4.

四. 操縱步驟

1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時(shí)后,4℃冰箱放置16~18小時(shí).

2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,最后將反應(yīng)板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.

3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時(shí).

4. 洗滌同2.

5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時(shí)作稀釋液對(duì)照.37℃放置2小時(shí).

6. 洗滌同2.

7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí).

8. 洗滌同2.

9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘.

10. 加終止液:每孔50微升.

11. 觀察結(jié)果:用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄450nm讀數(shù).

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